碱性磷酸酶检测试剂盒怎么用,注意事项 碱性磷酸酶对照表
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一、碱性磷酸酶检测试剂盒怎么用,注意事项
碱性磷酸酶检测试剂盒(PNP比色法)用法(仅供参考)1、检测工作液的配制:显色工作液的配制:取出一个pNPP,冷却至室温,溶于2ml ALP测定缓冲液中,混匀,冰上预冷备用。新配制的显色工作液应在6小时内用完。(2)标准工作溶液的制备。2、准备样品:
细胞或组织样本:取适量细胞或组织裂解液,必要时匀浆,低速离心上清液,于-80冷冻,用于碱性磷酸酶检测。血浆、血清和尿液样本:血浆和血清按常规方法配制后可直接用于本试剂盒的测定,尿液也可直接用于测定,冷冻于-80,但为了消除样本本身颜色的干扰,应设置有血浆或血清但无底物的对照。
高活性样品:如果样品中含有高活性的碱性磷酸酶,可用原裂解液或PBS稀释,或用ALP测定缓冲液稀释。3、样品添加:
根据下表设置96孔空白对照、标准品和待测样品。溶液应按顺序加入,并注意避免产生气泡。标准品用量分别为5、10、20,25、40,50l,50l直接加入待测样品中。如果样品中碱性磷酸酶活性过高,可在测定前适当减少或稀释样品用量。检测样品最好设置平行孔。4、轻轻混合并孵育。5、通过向每个孔添加终止溶液来终止反应。
6、检测405纳米处的光吸收值。如果不能检测405nm,也可以检测400 ~ 415 nm范围内的光吸收值。一般来说,检测应该在几个小时内完成。注1、待测样品不得含有磷酸酶抑制剂,并应避免反复冻融。2、建议每次做一个标准曲线,使标准更准确,标准应避免反复冻融。
3、如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计进行测定,但要根据比色皿的最小检测体积考虑使用小比色皿。4、中测得的样本值高于标准曲线的上限,应使用ALP检测缓冲液稀释样本并重新测量。5、 A显色工作液需要在配制后当天用完,所以请注意多准备一些样品一起检测。6、为了您的安全和健康,请穿实验服和戴一次性手套。
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