相信蛋白质含量的测定方法，bca试剂盒的知识很多朋友都不是很了解，今天恋上小编特意整理了这方面的知识，希望能帮助到大家!

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一、蛋白质含量的测定方法

一、蛋白质含量的测定方法

蛋白质含量的十种测定方法如下一、紫外直接测定法：该方法是在波长280nm处直接测定蛋白质。选择Warburg公式，光度计可以直接显示样品的浓度，或者选择相应的换算方法将吸光度值换算成样品的浓度。蛋白质测定过程很简单，先测试空白溶液，然后直接测试蛋白质。所以看起来结果很不稳定。蛋白质直接定量法适用于检测相对纯净、成分单一的蛋白质。

与比色法相比，紫外直接定量法快速、操作简单。但是容易被平行物质干扰，比如DNA此外，灵敏度低，并且要求蛋白质的浓度高。二、紫外吸收法：

实验原理：大部分蛋白质分子中含有芳香族氨基酸残基(酪氨酸和色氨酸)，使蛋白质在280nm的紫外区有最大吸收，该波长范围内的吸收值与蛋白质的浓度成正比。这一特性可用于定量测定蛋白质的含量。0.1-0.5mg/ml蛋白质溶液可用紫外吸收法测定，简单快速，不消耗样品，低浓度盐不干扰测定。因此，这种方法被广泛应用于蛋白质的制备。

三、缩二脲法：实验原理：缩二脲(NH3CONHCONH3)是两分子尿素在180左右加热，释放出一分子氨的产物。在强碱性溶液中，缩二脲与CuSO4形成紫色络合物，称为缩二脲试验。任何具有两个酰胺基团或两个直接相连的肽键，或由中间碳原子连接的肽键的化合物，都有缩二脲试验。

紫色络合物的颜色与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量和氨基酸组成无关，因此可以用来测定蛋白质的含量。测定范围为1 ~ 10毫克蛋白质。干扰该测定的主要物质是硫酸铵、Tris缓冲液和一些氨基酸。四、BCA方法：

实验原理：BCA检测法是一种改进的劳里测定法。与Lowry法相比，BCA法具有操作更简单、试剂更稳定、几乎不受干扰物质影响、灵敏度更高(微量检测可达0.5g/ml)、应用更灵活等优点。蛋白质分子中的肽键在碱性条件下可与Cu2络合形成复合物，同时Cu2可被还原为Cu。

喹啉甲酸及其钠盐是水溶性化合物。在碱性条件下，它们能与铜结合形成深紫色的化合物。这种稳定的化合物在562nm处有很强的吸收值，化合物的颜色与蛋白质的浓度成正比。因此，可以用比色法测定蛋白质的含量。五、方法：

实验原理：蛋白质在碱性溶液中将其肽键与Cu2螯合形成蛋白质-铜络合物，还原酚试剂磷钼酸生成蓝色化合物。在一定条件下，以蓝深度与蛋白质浓度的线性关系作为标准曲线，测定样品中蛋白质的浓度。六、考马斯亮蓝法：

实验原理：考马斯亮蓝法是一种利用蛋白质-染料结合原理，快速、灵敏地定量测定微量蛋白质浓度的方法。考马斯亮蓝G-250有两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它通过范德华力与蛋白质结合，在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质与染料的结合符合比尔定律。

这种与蛋白质结合的染料颜色为红色和蓝色，最大光吸收从465nm变化到595nm。通过测量595nm处光吸收的增加，可以知道与该染料结合的蛋白质的量。蛋白质和染料的结合是一个快速的过程，大约2分钟就可以完成反应，表现出最大的光吸收，可以稳定1小时。之后，蛋白质-染料复合物聚合并沉淀。七、凯氏定氮法：

实验原理：凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量。如果蛋白质的氮含量已知，这种方法可以用来测定样品中蛋白质的含量。当蛋白质与浓硫酸共热时，碳和氢被氧化成二氧化碳和水，而氮被转化成氨，氨进一步与硫酸反应生成硫酸铵。这个过程通常被称为“消化”。

但这种反应比较慢，通常需要加入硫酸钾或硫酸钠来提高反应液的沸点，并加入硫酸铜作为催化剂来促进反应。八、容量检测试剂盒：

福林酚试剂法包括两步：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜反应生成蛋白质-铜络合物；第二步，福林试剂被这种络合物还原生成深蓝色，颜色深浅与蛋白质含量成正比。定量范围为5100微克/毫升蛋白质。福林试剂的显色反应是由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，所以如果样品中含有酚类、柠檬酸和巯基化合物，就会产生干扰。

此外，由于酪氨酸和色氨酸含量不同，不同的蛋白质具有稍微不同的颜色强度。九、BCA检测试剂盒：在碱性条件下，蛋白质将Cu2还原为Cu，Cu与BCA试剂形成紫色络合物，测定562nm处的吸收值，与标准曲线比较，即可计算出待测蛋白质的浓度。常见的去污剂SDS、TritonX-100和Tween的浓度不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA、EGTA)、还原剂(DTT、巯基乙醇)和脂质的影响。

在实验中，如果发现样品稀释液或裂解物本身的背景值较高，可以尝试布拉德福德蛋白浓度测定试剂盒。十、分光光度计法。1、取8支(或更多)干净的10毫升离心管，并标上编号。2、取100ulBSA，加入2.4 ml PBS，稀释至最终浓度为0.2mg/ml。3、5G250染料溶液使用前应混合均匀3-5次。取10ml 5G250染料溶液，加入40ml双蒸水，混匀成1G250染料溶液。这种1G250染料溶液可在4保存一周。

4、根据下表添加试剂(每个孔5ml，其余用于清洁比色杯)。

以上就是关于蛋白质含量的测定方法的知识，后面我们会继续为大家整理关于bca试剂盒的知识，希望能够帮助到大家！