相信ELISA检测试剂盒是用来做什么的？，elisa试剂盒的原理的知识很多朋友都不是很了解，今天恋上小编特意整理了这方面的知识，希望能帮助到大家!

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一、ELISA检测试剂盒是用来做什么的？

二、elisa试剂盒实验原理

一、ELISA检测试剂盒是用来做什么的？

ELISA检测试剂盒用途

ELISA检测试剂盒用于体外定性检测人血清或血浆中抗人戊型肝炎（HEV）病毒IgM抗体。

ELISA检测试剂盒检测原理

ELISA检测试剂盒采用定性夹心免疫分析技术，采用合成HEV肽抗原包被微孔360问答板条。这些肽是中国HEV毒株的核心氨基酸，与国家HEV毒株的氨基酸相结合。列胡伊核心序列中的高抗原性肽来源于该菌株的开放阅读框2和开放阅读框3。

将样品或标准品添加到孔中并孵育。如果存在HEV IgM 抗体，这些抗体将与HEV 肽抗原结合并固定在其上。清洗板以去除其他非特异性抗体和样品。其他外部根成分。

然后添加山羊抗人IgM-HRP（辣根过氧化物酶）酶缀合物。第二次孵育后，酶缀合物将与第一次孵育中结合的HEV IgM 抗体结合。洗板除去未使用的结合酶结合物，加入TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）底物溶液，第三次孵育时发生酶-底物反应，仅那些含有裂解的HEV IgM抗体的。仅当酶缀合物形成的复合物被掺入时，孔的颜色才会改变。添加硫酸溶液终止酶与底物之间的反应，并测量O.D。波长值：450nm。遵循此HEV IgM 抗体ELISA 试剂。根据盒子的测试标准，具有O.D.的样品。大于或等于截止值的值最初被视为正值。

二、elisa试剂盒实验原理

从大的角度来看，上海科伊博科技的ELISA是一种酶联免疫分析技术。免疫酶技术以酶为标记物，标记抗体或抗原后，与相应的抗原或抗体发生反应，利用标记酶相应底物的显色反应作为抗原、抗体定性和定量检测的基础。目前应用最广泛的免疫酶技术是酶联免疫吸附试验（ELISA），如果分类的话属于异相固相酶免疫分析。所谓异质是指检测时不需要将酶标抗原抗体与游离抗原抗体分开，所谓固相是指ELISA 96孔板的固相载体。看下面均相酶联免疫分析原理图：ELISA的主要原理很简单，有三个，1、包被的抗原或抗体可以物理吸附在固相载体表面，可能的原理是蛋白质与聚苯乙烯表面之间的疏水部分相互吸附，吸附后可保持抗原抗体反应等免疫活性；保持酶的免疫活性和催化特性； 3、 显色酶结合物与包被在固相载体上的相应抗原或抗体结合，也固定在固相载体上。添加酶底物后，即可发生显色反应，根据反应颜色深浅可计算出抗原或抗体的相对含量。 ELISA实验设计根据检测对象的不同，我将分别给童鞋介绍抗原检测方法和抗体检测方法的设计。抗原检测设计1、双抗体夹心法，针对至少2种多价抗原的抗原决定簇。首先，介绍抗原决定簇。抗原决定簇是决定抗原性的特殊化学基团，也称为表位。理论上，抗原决定簇可以诱导单克隆抗体的产生（如果有童鞋，需要问一下单克隆抗体，是个奇怪的东西，稍后介绍）。由6-12个氨基酸或碳水化合物基团组成，可以由连续序列（线性表位）或不连续的三维蛋白质结构（构象表位）组成。临床上存在多种具有两个抗原决定簇的多价抗原，其中以HBsAg、AFP、HCG等大分子抗原较为常见。检测步骤也简单，即涂布、水洗、加样、水洗、加样、水洗、显色。具体的，首先将纯化的相应抗体包被于固相载体上，然后加入待测样品。如果其中含有待测抗原，它就会与固相抗体结合。洗去杂质后，加入酶标检测抗体。进行反应，洗掉多余的酶标抗体，加入底物显色，显色与否以及显色的深浅代表待测抗原的存在及相对含量，简单。双抗体夹心法检测大分子抗原应注意几点。 1、固相抗体和酶标检测抗体必须针对待测抗原的两个不同表位，否则两种抗体会竞争同一个决定。 2、如果待测样品是血清，要注意风湿病患者体内是否存在风湿因子RF，它可以神奇地结合固相抗体，检测3、包被固相抗体的含量相抗体必须高于样品中抗原含量，否则检测含量会低于实际含量； 4、如果有童鞋，想省事，就把待测样品和酶标检测抗体同时加入到固相载体上。当酶标检测抗体高于样本中待测抗原时，就会出现假阴性结果。这种现象称为钩子效应。 2、 小分子抗原的竞争方法。

这种方法也可以用于大分子抗原，但与双抗体夹心法的强大策略相比，竞争法根本没有优势，所以竞争法仅用于检测小分子抗原的边缘领域。分子。临床上主要用于T3、T4、黄体酮等激素和药物。检测步骤比双抗体夹心法简单。涂布、水洗、加样、水洗、显色，少了加样一步，但设计较为复杂。首先，将纯化的相应抗体包被于固相载体上。则每组样品需要分为两组，一组加入酶标检测抗原与样品预混合的混合物，一组只加入酶标抗原。两组颜色唯一的区别是待测抗原的含量，这有点天哪。还需要注意的是，对于竞争法，酶标抗原和待测样品必须提前混合，然后同时加入固相载体，否则会造成不公平竞争和偏差在检测中；从方法上来说，抗体的检测设计有间接法、双抗原夹心法、竞争法和捕获法四种设计。 1、 间接法，这是检测抗体最常用、最简单的方法。操作步骤与双抗体夹心相同，只是涂层上包被的是纯化的相应抗原而不是抗体。加入样品后，洗涤，然后加入酶标抗抗体，然后显色。颜色深浅与样品中待测抗体的浓度呈正相关。这种间接法的原理和步骤与双抗体夹心法相同。为了区分它们，包被抗原检测抗体称为间接法。以此类推，之前的双抗体夹心法也可以称为直接法。命名其实就是这样的东西，太多的规则很容易让人摸不着头脑。间接法也有其自身的一些特点。 1、酶标抗抗体可以选择性检测抗体亚型，可用于鉴定感染时期。如果是IgM，则表明感染早期； 2.酶标抗抗体检测抗体特异性低。很容易产生误报。如果密封不彻底，可能会出现全板正极，这是相当可怕的。这种方法临床上常用来检测抗HCV抗体、抗HEV抗体、抗CMV抗体、抗HSV抗体、抗沙眼衣原体抗体等2、双抗原夹心法，这个完全是一种双抗体夹心法的模仿者。原理和步骤与双抗体夹心法相同。与间接法相比，它具有优越的灵敏度和特异性，但并不十分常用，因为基于目前的技术条件，仍很难获得可用于ELISA检测的纯化抗原。困难。临床上常用于检测HIV抗体、TP抗体、抗HBs抗体等，这些检测要求特别高的特异性、灵敏度和准确性。 3、 竞争方法与检测抗原的竞争方法完全相同。在临床实践中应用不多。我仔细总结了两个很有代表性的，各有各的特点。 1、 抗HBc 抗体。检测方法与抗原相同。包被抗原后，将其分为两组。一组添加预混合的酶标抗体和待测样品。另一组仅添加酶标抗体。两组结果的颜色差异可以代表待测抗体的相对含量。需要说明的是，待测抗体与酶标抗体是同一种物质； 2、 抗-HBe抗体检测，方法与抗原竞争法设计略有不同，包被的抗-HBe 对于HBe抗体，测试也分为两组。一组首先添加酶标记的HBeAg，然后立即添加待测样本。另一组仅添加酶标记的HBeAg。两组颜色的差异代表待测抗体的相对含量。本设计中包被抗体和待测抗体是同一种物质。值得注意的是，混合组并不是先混合后加入，而是先加入待测抗体，再加入酶标抗原。

所有这些复杂的注意事项确实很容易让人迷惑，但童鞋们只需要记住一件事，竞争是残酷的，我们必须千方百计保证比赛的公平性，这样才不会出现失误。 4、 捕获法，这种方法比较少用，因为它的优点是可以识别抗体类型，只用于需要早期诊断的急性感染或具有爆发性感染的疾病，如HAV-IgM、HBc-IgM 、ToRCH等等等。其原理仍然逃不开经典的双抗体夹心。具体方法是先包被能识别抗体类型的抗抗体，洗涤后加入样品，再次洗涤，加酶标记抗原，洗涤后显色。这些步骤可以通过闭上眼睛来实现，把它写下来。最后多说几句，与抗原检测不同，抗体检测的设计并不是基于抗体的结构特征。这么多的设计方法，童鞋在使用的时候都会选择障碍物。掌握两个原则，1.实验要求，如果特异性和准确性特别高的话，一定是双抗原夹心法。如果要求一般的话，那么间接法是最好的选择。如果想明确抗体的类型，最好的选择是捕获法； 2. 实验费用与纯化抗体不同。有时获得纯化抗原非常困难，更不用说两种不同的纯化抗原，因此双抗原夹心法在临床上并未广泛应用。 ABS-ELISA 顺便说一下，ABS-ELISA 的设计其实和上面的一样。它只是通过亲和素-生物素系统（ABS）的显色反应来提高检测灵敏度，但增加了操作步骤和实验成本，而且现在单克隆抗体技术越来越成熟，抗体特异性和亲和力都得到了很大的提高，而且灵敏度也不再是问题，所以这些劣质设备不再常用。结果判断最后说一下ELISA结果判断，分为定性和定量两种。对于定性测试，请参考阴性和阳性对照的吸光度，并将其报告为P/N 或S/CO 比。 1、P/N比是指（待测样品-空白对照）/（阴性样品-空白对照）。一般P/N2.1判定为阳性。或许求知欲强的童鞋会问，那么比赛方式用P/N比如何判断，呵呵，这里就不说了，卖给我吧，可以百度或者私信我； 2、S/CO比值，S为待测样品的吸光度值，CO为截止值，通常取阴性对照平均值的2.1倍。 S/CO比1为正，竞争法S/CO比1为正。定量测试没什么好说的。老老实实地制作标准曲线，既锻炼了实验操作能力，又可以作为实验的内参。请记住，有这样一个规则，定性检测不能通过肉眼判断，必须通过酶标仪检测，定量检测必须在与待测样品相同的实验条件下进行。这很难，但为了对实验负责，你必须放手。

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