dna琼脂糖凝胶电泳实验现象? 琼脂糖凝胶电泳操作步骤
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一、dna琼脂糖凝胶电泳实验现象?
DNA分子在琼脂糖凝胶中脉冲时具有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在等电点以上的ph溶液中带负电,在电场中向正电极移动。由于糖-磷酸骨架的重复结构,相同数目的双链DNA的净电荷几乎相同,因此它们可以以相同的速度向正极移动。
二、gel loading dye purple使用说明
凝胶负载染料,紫色(6X)是NEB的主要凝胶负载染料,适用于尖锐和紧凑的条纹。没有紫外线阴影。包含Ficoll,打造更亮更紧的表带。含有乙二胺四乙酸以防止酶促反应。与琼脂糖和非变性聚丙烯酰胺凝胶相容。我们装载染料的紫色凝胶可以锐化波段,消除其他染料看到的紫外线阴影。
琼脂糖凝胶电泳是实验室常用的技术之一,广泛应用于DNA和RNA的鉴定和分离。实验操作比较简单,主要步骤包括:(1)样品制备:在核酸样品(RNA或DNA)中加入电泳上样缓冲液,如凝胶上样染料,紫色(6x),即5个样品加1个缓冲液;
(2)制胶:称取1g琼脂糖,加入100ml TAE(1x)或TBE(1x)配成1%琼脂糖,在微波炉中加热几分钟使琼脂糖完全熔化,加入10l cel red,混匀,倒入制胶模具中,插入适当孔径的梳子,待凝胶凝固后拔出梳子,放入装有TAE(1x)或。注:TAE比TBE应用更广泛。TAE通常用于橡胶回收,但其缓冲能力较低,因此不适合长期电泳。
相比之下,TBE离子强度高,缓冲能力好,可以长时间维持电泳。如果DNA大小小于1000bp,并且凝胶没有回收,则缓冲液更好。
(3)电泳:将(2)中的缓冲液完全浸入琼脂糖凝胶中,将标记物和样品加入上样孔中,在120V下进行电泳(通常电泳时间小于半小时)。注意,样品装载孔应在负电极的同一侧。(4)成像:对电泳后的凝胶进行紫外成像,并拍照记录。(5)胶水回收,根据需要选择。
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