全封闭无菌试验过滤培养器怎么用 无菌过滤器使用方法

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一、全封闭无菌试验过滤培养器怎么用

一、全封闭无菌试验过滤培养器怎么用

全封闭无菌检验过滤培养箱如何使用目的：建立和完善注射用青霉素钠无菌检验方法，确保检验结果的准确性和可靠性。方法：按照中国药典2010年版无菌检查方法（附录XI H）中膜过滤法进行。 1 试验环境及材料1.1 试验环境在环境洁净度10000级、局部洁净度100级的单向气流无菌室内进行。 1.2 仪器智能集菌器（杭州泰林生物技术设备有限公司），PY330一次性全封闭细菌培养箱（杭州泰林生物技术设备有限公司）、生化培养箱（苏州威尔实验用品有限公司）、霉菌培养箱（苏州威尔实验用品有限公司）、生物安全柜（苏州安泰空气科技有限公司） 1.3 试验药物注射用青霉素钠1.4 试验菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大肠杆菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501] 、产孢梭菌[CMCC (B) 64 941]、白色念珠菌[CMCC (F) 98 001]、黑曲霉[CMCC(V)98 003]。 1.5 培养基、稀释液和缓冲液1.5.1 干粉培养基硫代乙醇酸液体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。 1.5.2 细菌稀释液0.9%无菌氯化钠溶液。 1.5.3 洗涤所用缓冲液为pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。 2 方法与结果2.1 菌液按照《中国药典2010年版》附录XIH无菌检验法中菌液制备方法制备。 2.2 菌落计数：取金黄色葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种于含1.5%琼脂的培养基中。在巯基乙酸盐液体培养基中，在30~35'E的生化培养箱中孵育24~48小时。取白色念珠菌液和黑曲霉液各1 m1，接种于改良马丁琼脂培养基中。将霉菌在23C-28C 霉菌培养箱中培养48 至72 小时并计数。 （将上述菌液分别接种于两块平板中，取平均值，设阴性对照。） 2.2 方法学验证2.3.1 试验组（样品+阳性） 取一次性全封闭细菌培养箱（三联装））套，先用少量pH 7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取15瓶样品溶解于250ml缓冲液中，按膜过滤法过滤。样品过滤后，用pH 7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗。每次向每管中注入100ml冲洗液，充分摇匀，完全排空后循环5次。每管总冲洗量达到500 ml。洗涤后，将100ml改良Martin培养基分别注入两管中，另一管中注入100ml巯基乙酸液体培养基。另取一套细菌培养箱（三件装），按上述方法过滤、冲洗本品，注入100ml巯基乙酸液体培养基。将上述6管细菌培养物移至阳性对照室，置于阳性对照室。在装有硫乙醇酸液体培养基的细菌培养容器中，接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液、产孢梭菌菌液各1ml，并接种改良的白色念珠菌液和各1ml。将黑曲霉液体放入马丁培养基培养箱中，在上述温度下培养35天，观察结果。 2.3.2 阳性对照组，取一次性全封闭细菌培养箱2套（三联装），4管注入100 ml巯基乙酸液体培养基，2管注入100 ml改良马丁培养基。 100ml，将6菌液接种于阳性对照室相应管中作为阳性对照，在规定温度下培养35天，观察结果。

2.3.3 阴性对照组，取一次性全封闭细菌培养箱一套（二套），过滤适量缓冲液，然后分别注入100ml巯基乙酸液体培养基和改良马丁培养基，作为阴性对照，在上述指定温度下孵育14天并观察结果。 2.3.4 样品无菌检查：取15个样品，按上述相同方法操作。用500ml/管的冲洗量进行清洗。加入培养基后，在指定温度下培养14天。每日观察。如果培养14天，全部澄清；从而判定受试产品符合规定。结果的判断是与对照管比较。如果每个装有受试品的容器中的试验细菌均生长良好，则说明受试品的试验量在试验条件下没有抗菌作用或可以忽略其抗菌作用。按本检验方法和检验条件对供试品进行无菌检验。如果任何装有受试品的容器中的受试细菌生长微弱、缓慢或根本不生长，则表明受试品的试验量在试验条件下具有抗菌作用。增加冲洗量并增加培养基。用量、中和剂或灭活剂的使用、更换滤膜类型等，消除受试品的抗菌作用，重新进行方法验证试验。讨论目前，抗生素被广泛使用。对每种抗生素建立严格的质量标准，提高抗生素的质量显得尤为关键。因此，在建立新品种无菌检验方法时，对方法进行验证就显得尤为必要。膜过滤法作为无菌检验中的一种方法，具有准确、方便、快速的优点，是无菌检验中使用的重要方法。试验表明，上述方法操作简便，结果准确。因此，对该无菌检查方法的验证对于保证结果的可信度和准确性具有重要意义。

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