如何提取DNA粗提和精提的方法 精胺怎么提取

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一、如何提取DNA粗提和精提的方法

一、如何提取DNA粗提和精提的方法

就那株植物而言！原理是一样的。方法不同。1从植物组织中提取基因组DNA一、材料的幼叶。二、设备移液器、冷冻高速离心机、台式高速离心机、水浴锅、陶瓷研钵、50毫升离心管（带盖）、5毫升和1.5毫升离心管以及弯曲成钩子的小玻璃棒。三、试剂1、提取缓冲液I:100毫摩尔/升cl，ph 8.0，20毫摩尔/升ta，500毫摩尔/升acl，1.5% SDS。

2、提取缓冲液II: 18.6克葡萄糖、6.9克二乙基二硫代碳酸钠、6.0gpvp、240微升巯基乙醇，并加水至300毫升。3、80:4:16/氯仿：戊醇：乙醇4、 RNA海母液5、其他试剂：液氮、异丙醇、te缓冲液、无水乙醇、70%乙醇、3 mol/l NAAAC。四、操作步骤：1。向50毫升离心管中加入20毫升提取缓冲液I，并在60水浴中预热。

2.剪下5-10克幼苗或叶子，将液氮加入研钵中研磨成粉末，然后立即倒入预热的离心管中，用力摇晃并混合均匀，在60的水浴中保温30-60分钟（时间长，dna产量高），并不时摇晃。3.加入20毫升氯仿/戊醇/乙醇溶液，将其颠倒混合（需要戴手套以防止皮肤损伤），并在室温下静置5-10分钟以分离水相和有机相（如有必要，再次混合）。4.室温下以5000rpm的速度离心5分钟。

5.小心地将上清液转移到另一个50毫升离心管中，加入1倍体积的异丙醇，混合均匀，并在室温下放置一段时间以产生絮状dna沉淀。6.将1mlte加入1.5mleppendorf .用带钩的玻璃棒取出dna絮凝物，将其吸干在干净的吸水纸上，并转移到含有te的离心管中，dna将迅速溶解在te中。7.如果dna没有形成絮状沉淀，可以以5000rpm离心5分钟，然后将沉淀转移到te管中。以这种方式收集的沉淀物通常难以溶解在te中，因此可以将其放在60的水浴中15分钟以上以帮助溶解。

8.以3000rpm离心dna溶液5分钟，并将上清液倒入干净的5ml离心管中。9.在37下加入5lrna Sea（10g/L）10分钟以去除RNA（RNA一般对dna操作和分析没有影响，因此可以省略该步骤）。10.加入1/10体积的3mol/lnaac和2倍体积的冰乙醇，混合均匀，并在-20下放置约20分钟，dna将形成絮状沉淀。11.用玻璃棒取出dna沉淀物，用70%的乙醇冲洗，然后将其吸干在干净的吸水纸上。12.将dna重新溶解在1 mlte中，并将其储存在-20下。

13.取2ldna样品，在0.7%琼脂糖凝胶上电泳检测dna的分子大小。同时将15l稀释20倍，测定od260/od280以检测dna含量和质量。【注意】5g样品可获得500gdna，足以进行rflp、pcr等分析。

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