阴离子交换柱洗脱为啥增加盐离子 阴离子交换柱
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一、将四种核苷酸吸附于阴离子交换柱上时，应将溶液调到什么
电泳分离四种核苷酸时，应取pH3.5的缓冲液。在这个pH下，这四种单核苷酸之间的负电荷差别较大，都向正极移动，但移动速度不同，依次为：UMPGMPAMPCMP；(2)应采用pH8.0，可使核苷酸带更多负电荷，便于在阴离子交换树脂柱上吸附。尽管核苷酸在pH 11.4时具有更多负电荷，但过高的pH不利于分离。
不考虑树脂的非极性吸附时，根据核苷酸的负电荷，洗脱顺序为CMPAMP GMP UMP，但核苷酸与聚苯乙烯阴离子交换树脂之间实际存在非极性吸附，嘌呤碱基的非极性吸附是嘧啶碱基的3倍。由于静电吸附和非极性吸附的相互作用，洗脱顺序为CMP AMP UMP GMP。
二、阴离子交换柱洗脱为啥增加盐离子
改变洗脱液的pH值。阴离子交换基质结合带负电荷的蛋白质，而阳离子交换基质结合带正电荷的蛋白质。可以通过逐渐增加洗脱液中的盐浓度或增加洗脱液的pH值来洗脱结合的蛋白质。所以阴离子交换柱洗脱增加盐离子的目的是改变洗脱液的pH值。当pH值增加时，蛋白质阳离子化受到抑制，阳离子交换剂的吸附能力减弱。
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